Cad iad na bealaí éagsúla chun an DNA eachtrach a aistriú isteach sna baictéir?

Le go n-aistreofar an DNA eachtrach isteach sa chill óstach, cuirtear modhanna éagsúla i bhfeidhm. Tá dhá chatagóir leathana d'aistriú géine ag tarlú go nádúrtha nó go saorga le trasnaíocht daonna.

Aistriú géine cothrománach : Is féidir é a shainmhíniú mar ábhar a aistriú ó chillín amháin go cill eile seachas cill tuismitheora go hiníon.

Aistriú géine ingearaí: Sa chás seo, tá an t-aistriú géine idir an mháthaircheall agus an chillín iníon.

Baineann HGT [1] le claochlú, le haistriú agus le comhcheangal.

Claochlú : Táimid an-eolach ar thurgnamh Uí Ghríofa agus ar a phrionsabal athraithe. Is féidir é a shainmhíniú mar an nglacadh má tá an DNA nocht agus a chomhtháthú isteach sa chóras baictéarach. Breathnaítear ar chlaochlú go nádúrtha i bplandaí, ainmhithe agus baictéir. Is féidir claochlú a dhéanamh ar mhodhanna sonracha a chur i bhfeidhm go saorga, mar shampla leictreaphlátáil, modh ballistic, modhanna ceimiceacha etc.

Aistritheacht [2] : Tá sé cosúil le claochlú. Maidir le cealla eukaryotic, úsáidtear an focal claochlaithe le hailse agus dá bhrí sin glactar le focal aistrithe. Áirítear leis an bpróiseas aistrithe an víreas mar mheán chun an t-ábhar géiniteach a aistriú isteach sa chóras eukaryotic.

Comhoiriúnú : Is próiseas nádúrtha é i mbaictéir agus prokaryotes eile a éascaíonn atáirgeadh gnéasach. Tarlaíonn luí seoil nuair a chruthaítear an droichead comhcheangailte a cheadaíonn don chill deontóra (fireann) an t-ábhar géiniteach a aistriú chuig an gcillín faighteoir (baineann). Cruthaíonn an pili (ar a dtugtar pili gnéis) an dá bhaictéar an droichead comhcheangailte. Nóta: Baineann bacteriophages mar M13 úsáid as na rudaí seo chun a n-ábhar géiniteach a aistriú go díreach isteach sa chill bhaictéarach.

Tá na modhanna claochlaithe a úsáideann innealtóirí géiniteacha agus biteicneolaí chun na cealla a athrú aicmithe go forleathan i dhá chatagóir: Modhanna fisiceacha agus ceimiceacha.

1) Modhanna ceimiceacha:

CaCl2 Cóireáil: Dhícháileodh CaCl2 an cillfilmín. Dhéanfadh sé ceangal leis an DNA agus clúdódh sé muirear diúltach na fosfáite. Dá réir sin, is féidir leis an DNA dul isteach go héasca sa chill tríd an leathbhileog lipid. Cuireann CaCl2 an DNA i bhfeidhm ar chéim sheachtrach an scannáin lipid. Ag cur faoi réir Méadaíonn turraing teasa (42 ° C) ar an sampla toradh na gclaochladán.

PEG Treatment: Maidir le cealla plandaí, bainimid úsáid as PEG in ionad CaCl2. Is é atá i PEG ná 4000 móilíní Da agus díchobhsaíonn sé an scannán agus is casta é leis an DNA. Ansin is furasta an DNA a iompar isteach sa chill.

Baineann modhanna ceimiceacha eile le húsáid dextrans DEAE, Liposomes, nana-imreoirí etc.

2) Modhanna fisiceacha:

Electroporation: Baineann sé úsáid as cuisle leictreach chun poresanna sealadacha a ghiniúint sa scannán. Is féidir na plasmids beaga agus an DNA a ionchorprú go héasca trí mhodhanna ceimiceacha a úsáid, ach i gcás móilíní móra DNA, ní mór dúinn modhanna fisiciúla a úsáid. Mar sin féin, i gcás leictreaphlátála, ba cheart go mbeadh an tiúchan ard. I gcás cealla plandaí, tá na cill polaisiúicrídí agus bithmhóilíní eile mar hemicellulose, ceallalós, peictin etc. timpeall ar an gcill. Mar sin, caithimid leis an gcill le heinsímí amhail hemicellulose agus ceallalós an balla cille a bhaint agus an chill a thiontú go protoplast. Dá bhrí sin, is féidir pores sa scannán a dhéanamh go héasca agus is féidir DNA a aistriú isteach sa chill trí leictreaphlátáil.

http://www.scientzbio.com/s/

Modh dé-eiticiúil [4] : Tugtar modh bombardú cáithníní air freisin, modh gunna na gcáithníní, nó modh géine simplí. Is éard atá san ionstraim ná miocróbhainíní atá déanta suas de mhiotail throma ar nós Au, Ag, W etc. Is éard atá sa gunna freisin diosca réabtha, pláta a iompraíonn micreafarrbhainíní (luchtaithe le DNA), pláta stoptha, agus ar deireadh, pláta gabháltas cille . Nuair a scaoiltear an gunna, cuirtear an gás isteach sa ghunna as a dtiocfaidh briseadh an diosca réabtha. Gluaiseann an pláta leis an microcarrier (leis an DNA) i dtreo an phláta stoptha. Bhogfadh an microcarrier ansin agus rachaidh sé isteach sa chill. Mar sin aistrítear an DNA go díreach isteach sa chill. Mar sin féin, tá roinnt srianta ar ghunnaí a úsáid. Tá an deis ann cáithníní iolracha a chur isteach agus an carnadh a d'fhéadfadh a bheith ina chúis le ró-mhaolú na géine nó na tosta géine.

http://www.scientzbio.com/gene-transduction-device/

Micrea-instealltaí : Déanann siad pípéad an-mhín a úsáid chun na móilíní DNA a instealladh go díreach isteach i núicléas na cille le claochlú. Úsáidtear é le haghaidh cealla plandaí agus ainmhithe.

Tabhair faoi deara: Ba mhór agam do cheartuithe agus do mholtaí má tá na sonraí neamhábhartha.

Tagairtí agus Léamh Breise

Brown, TA, 2016. Anailís ar ghéin agus anailís DNA: réamhrá. John Wiley & Sons.

Wolff, JA, Malone, RW, Williams, P., Chong, W., Acsadi, G., Jani, A. agus Felgner, PL, 1990. Aistrítear géin dhíreacha isteach i matán na luch in vivo. Eolaíocht, 247 (4949 Cd 1), lgh.1465-1468.

Lorenz, MG agus Wackernagel, W., 1994. Aistriú géine baictéarach trí chlaochlú géiniteach nádúrtha sa chomhshaol. Athbhreithnithe micribhitheolaíocha, 58 (3), lgh.563-602.

Lurquin, PF, 1997. Aistriú géine ag electroporati